細胞RNAi技術

RNAi技術服務： 
近年來的研究表明，將與mRNA同源的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA（dsRNA）導入細胞，可以使mRNA發生特異性的降解，從而抑制其相應基因的表達。這種轉錄后基因沉默機制（Post-transcriptional gene silencing, PTGS）被稱為RNA干擾（RNAi）。由于RNAi具有高度的序列專一性，可以特異地使特定基因沉默，獲得功能喪失或降低突變，因此RNAi可以作為一種強有力的研究工具，用于功能基因組的研究。

科佰生物應用國外知名公司的RNAi Designer平臺，可對靶基因序列進行干擾位置效應評價和序列同源型分析，完成siRNA/miRNA多種序列的的設計，并提供從siRNA合成、RNAi載體構建到RNAi功能驗證等全面的RNAi解決方案。

siRNA合成：

對于瞬時基因沉默實驗，化學合成siRNA的方法操作簡便，容易獲得高水平的瞬時沉默效果，特異性強。我們通過嚴格設計來增強siRNA的專一性；針對某靶基因設計的3條siRNA可保證其中兩條的Knockdown效率達到75％（在轉染效率大于80％的情況下）。

在RNAi效應階段，siRNA雙鏈結合一個核酶復合物從而形成所謂RNA誘導沉默復合物（RNA-induced silencing complex，RISC）。激活的RISC通過堿基配對定位到同源mRNA轉錄本上，并在距離siRNA 3’端12個堿基的位置切割mRNA。

實驗流程：

1）根據序列信息，進行化學合成；

2）純化及定量；

3）凍干處理；

4）細胞轉染預實驗，優化轉染條件；

5）瞬時轉染或穩定轉染；

6）RT-PCR或Western blot檢測轉染后某一時間點靶基因的RNA水平或蛋白水平的變化。

客戶提供：

1）目的基因的Accession Number（Human、Mouse或Rat種屬）以及技術要求（包括OD和nmols的精確數量、純化類型和修飾要求等）；

2）細胞株和詳細的細胞培養的操作步驟；

3）一抗（如果需要Western blot檢測）。

我們提供：

1）轉染效率分析；

2）Knockdown結果。

質量保證：

針對某靶基因設計的3條siRNA可保證其中2條的Knockdown效率達到75％（在轉染效率大于80％的情況下）。

shRNA的構建：

構建shRNA表達載體，實現shRNA在細胞中穩定表達，能夠彌補瞬時轉染持續時間短的不足。

服務流程：

1）mRNA序列分析；

2）引物設計及合成；

3）單鏈互補引物退火；

4）將片段克隆至載體；

5）測序以確保插入序列正確性；

6）細胞轉染預實驗，優化轉染條件；

7）瞬時轉染或穩定轉染；

8）RT-PCR或Western blot檢測轉染后某一時間點靶基因的RNA水平或蛋白水平的變化。

客戶提供：

1）目的基因的Accession Number（Human、Mouse或Rat種屬）；

2）細胞株和詳細的細胞培養的操作步驟；

3）一抗（如果需要Western blot檢測）。

我們提供：

1）構建好的表達載體和相應的甘油菌；贈送陰性對照甘油菌；

2）測序報告；

3）轉染效率分析；

4）Knockdown結果。

質量保證：

針對某靶基因設計的3條shRNA序列，在轉染效率>80％的前提下，我們保證至少有1個克隆可以達到70％轉錄水平的沉默效率。

miRNA的構建：

RNAi載體利用細胞內源性的miRNA加工機制，相比傳統shRNA載體可更高效地表達RNA發夾結構，并具有采用GFP進行表達追蹤的優點。每個基因設計的4條序列我們保證至少有2條可以達到至少70％轉錄水平的Knockdown效率（在轉染效率大于80％的情況下）。

實驗流程：

1）針對特定基因，設計miR RNAi序列，合成該序列并退火生成雙鏈DNA；

2）將DNA與載體連接并轉化；

3）測序驗證miRNA序列的正確性；

4）細胞轉染預實驗，優化轉染條件；

5）瞬時轉染或穩定轉染；

6）RT-PCR或Western blot檢測轉染后某一時間點靶基因的RNA水平或蛋白水平的變化。

客戶提供：

1）目的基因的Accession Number（Human、Mouse或Rat種屬）；

2）細胞株和詳細的細胞培養的操作步驟；

3）一抗（如果需要Western blot檢測）。

我們提供：

1）構建好的表達載體和相應的甘油菌；贈送陰性對照甘油菌；

2）測序報告；

3）轉染效率分析；

4）Knockdown結果。

質量保證：

針對某靶基因設計的3條miRNA序列，在轉染效率>80％的前提下，我們保證至少有1個克隆可以達到70％轉錄水平的沉默效率。

服務說明:

1. RNAi技術服務不包括基因功能檢測，如需檢測，需要另外評估和收費；

2. 客戶可以提供實驗原材料，也可以查找本公司模板庫、載體庫、細胞庫，也可以由我們公司代購；

訂購方法：