腺病毒包裝

腺病毒包裝：

腺病毒是一種線性雙鏈DNA病毒，由于其具有宿主范圍廣、可感染分裂和非分裂細胞、高滴度制備、外源基因裝載容量大等優點，重組腺病毒已越來越廣泛地被應用于基礎研究和臨床試驗中，并成為世界上最常用的基因治療載體之一。

腺病毒包裝的優點：

1、可感染的細胞種類多，宿主廣泛;

2、感染效率高，特別適合質粒載體轉染效率低的細胞，如原代細胞、神經細胞等，且目的蛋白表達水平高;

3、可包裝大片段的外源基因，高達10kb;

4、不整合到細胞染色體中，生物安全性高。

腺病毒包裝技術主要原理是將目的片段克隆到腺病毒表達載體上，表達載體和包裝質粒通過重組導入腺病毒包裝細胞進行包裝，包裝好的病毒進一步進行擴增和滴度測定。

科佰生物擁有豐富的病毒包裝經驗，成功為很多客戶包裝出需要的病毒。公司提供2種較常用的系統：AdEasy、AdMAX。

AdEasy系統：

AdEasy包裝系統主要的特點是利用Cre/loxP系統在大腸桿菌(BJ5183)中完成外源基因插入腺病毒基因組的過程，獲得環狀的重組腺病毒基因組，并且具有在細菌中復制的必需元件。將重組腺病毒基因組酶切線性化后轉染HEK293細胞，避免了雙質粒共轉染得到重組腺病毒。

使用這個系統需要注意以下問題：

1.要用能表達Cre重組酶的特定的大腸桿菌，建議建立菌種庫以免細菌發生變化;

2.由于重組是在細菌中發生的，微小的基因組變化不易發現;

3.要獲得高品質的重組腺病毒毒種(高病毒產量、高目的基因表達)應挑選多個重組腺病毒質粒，分別轉染HEK293細胞，獲得多個重組病毒來篩選。

可根據不同的研究需求構建腺病毒穿梭載體，如用于RNAi的腺病毒載體、用于基因過表達的腺病毒載體、用于啟動子活性研究的腺病毒載體等

AdMAX系統：

AdMax包裝系統是通過Cre/loxP 獲得重組病毒，這個過程發生在HEK293細胞中，從而避免在細菌中重組。將克隆了外源基因的腺病毒穿梭質粒與攜帶了腺病毒大部分基因組的包裝質粒共轉染HEK293細胞，利用Cre/loxP系統的作用實現重組，產生重組腺病毒。這個系統有多種優勢，包括操作簡便、重組效率高、獲得的病毒產率高、目的基因的表達水平高(因為mCMV啟動子比hCMV啟動子強若干倍)等。

可根據不同的研究需求構建腺病毒穿梭載體，如用于RNAi的腺病毒載體、用于基因過表達的腺病毒載體、用于啟動子活性研究的腺病毒載體等

技術流程:

1.獲得目的基因序列;

2.構建病毒表達載體質粒;

3.表達載體質粒和包裝質粒重組;

4.感染HEK293，包裝出病毒;

5.病毒擴增、濃縮;

6.滴度測定。

服務說明:

1.客戶提供目的基因的序列，如果提供模板，請告知載體、酶切穩點等信息;

2.默認使用AdEasy系統，有明確要求請告知;

3.序列過長可能影響病毒滴度;

4.目的蛋白的功能驗證另外收費。

提交的產品和資料:

1.實驗報告;

2.提供至少1ml滴度>10^10PFU/ml的病毒，特殊基因除外;

訂購方法：

如需幫助，請發送郵件至sales@cobioer.com或撥打4008750250，科佰生物的技術支持將竭誠為您服務。